以两阶段流加策略在大肠杆菌中生产褐色嗜热裂孢菌葡萄糖异构酶

为达到褐色嗜热裂孢菌葡萄糖异构酶在大肠杆菌中的过量表达,褐色嗜热裂孢菌葡萄糖异构酶的编码基因被植入含有T7强启动子的表达载体pET-24a(+)中,并转入重组大肠杆菌BL21 (DE3)进行表达,于3L发酵罐中采用两阶段补料策略进行高密度发酵产酶.在诱导前阶段,设定比生长速率μset=0.25,补料流加速率以指数方式增长;在诱导阶段,根据诱导后培养基中甘油残留量和乙酸的积累量,补料流加速率以梯度方式下降.在此流加策略下进一步考察影响发酵产酶的诱导强度、诱导节点、诱导温度和复合氮源的添加量等因素.最终根据两阶段流加策略,在乳糖流加速率0.2 g/(L·h),诱导时菌浓(DCW)30 g/L,诱导温度25℃和适量添加复合氮源的条件下,1 mL发酵液的菌体细胞内重组GIase产量达到124U,这是通过菌体发酵产GIase获得的最高产量.