miR-486-5p在氧化应激引起人骨髓间充质干细胞凋亡中的作用

目的：观察microRNA-486-5p（miR-486-5p）在氧化应激引起人骨髓间充质干细胞（hMSCs）凋亡中的作用并探讨其作用机制。方法：hMSCs经培养鉴定后分为5组：空白对照组、H2 O2组、miR-486-5p模拟物＋H2 O2组、抑制物（αnti-miR）＋H2O2组及相应的阴性对照（scrambled control）＋H2O2组。荧光定量PCR（real-time PCR）检测氧化应激诱导hMSCs凋亡过程中miR-486-5p的表达变化。用脂质体分别转染miR-486-5p的模拟物、抑制物及阴性对照到hMSCs。应用MTT、Hoechst标记和流式细胞术的方法检测miR-486-5p对氧化应激介导细胞活性下降及凋亡效应的影响，Western blotting检测凋亡相关蛋白、Akt与其磷酸化水平，采用试剂盒测定caspase-3活性。结果：H2O2诱导hMSCs凋亡过程中miR-486-5p的表达较对照组显著下降（P＜0.05）。与阴性对照组相比，在hM-SCs中过表达miR-486-5p，能使细胞在氧化应激情况下活性显著下降，凋亡发生率增高，蛋白Bcl-2／Bax 比值、caspase-3酶原含量及Akt磷酸化水平降低，caspase-3活性增强；而使用抑制物阻遏miR-486-5p的作用后，细胞在氧化应激条件下活性增加，凋亡发生率降低，蛋白Bcl-2／Bax比值及Akt磷酸化水平升高，caspase-3活性下降。结论：过表达miR-486-5p促进氧化应激引起的hMSCs凋亡，阻遏miR-486-5p的作用抑制氧化应激条件下的hMSCs凋亡，其中作用机制可能与调控Akt通路有关。